TẠO DÒNG VÀ BIỂU HIỆN GEN nahC MÃ HÓA 1,2-dihydroxynaphthalene dioxygenase CỦA VI KHUẨN Paenibacillus naphthalenovorans 4B1

Tóm tắt

Các hợp chất hydrocarbon thơm đa vòng được sử dụng trong nhiều ngành công nghiệp đã gây ô nhiễm môi trường và ảnh hưởng đến sức khỏe con người. Naphthalene, hợp chất hydrocarbon thơm đa vòng đơn giản nhất, được sử dụng như là hợp chất mô hình để nghiên cứu quá trình phân hủy sinh học ở vi khuẩn. Enzyme 1,2-dihydroxynaphthalene dioxygenase, enzyme phân cắt vòng benzen, chuyển hóa các hợp chất trung gian trong quá trình phân hủy naphthalene thành các hợp chất ít độc hơn. Trong nghiên cứu này, gen nahC mã hóa 1,2-dihydroxynaphthalene dioxygenase từ vi khuẩn ưa nhiệt Paenibacillus naphthalenovorans 4B1 được tạo dòng vào vector pGEM-T Easy. Sau khi xác nhận trình tự DNA chính xác, gen nahC được ghép nối vào vector biểu hiện pCold^TM II và biến nạp vào vi khuẩn Escherichia coli BL21. Kết quả điện di SDS-PAGE cho thấy gen nahC đã được biểu hiện thành công trong E. coli BL21 ở điều kiện cảm ứng 0,5 mM IPTG. Enzyme tái tổ hợp thu được có trọng lượng phân tử xấp xỉ 35 kDa. Kết quả này là cơ sở cho việc nghiên cứu tinh sạch và xác định các đặc tính của enzyme.